淺析沃特世色譜柱平衡緩沖液的選擇
更新更新時(shí)間：2019-10-17
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沃特世色譜柱是以高純度具有良好機(jī)械穩(wěn)定性的硅膠為基質(zhì)，通過使用高純度鍵合試劑在硅膠上鍵合季銨強(qiáng)陰離子交換基團(tuán)，具有季銨和苯基官能團(tuán)的混合化學(xué)結(jié)構(gòu)。這種強(qiáng)陰離子交換相與疏水相的混合模式可以為各種有機(jī)化合物如芳香族或脂肪族羧酸和磺酸等提供和高選擇性的分離。硅膠：球形， 高純度（金屬雜質(zhì)10ppm）
沃特世色譜柱洗脫液的選擇
陰離子交換色譜柱的選擇：
離子交換色譜柱通常粗短，直徑和長(zhǎng)度比一般為1：10～1：50。
沃特世色譜柱裝柱：
1、色譜柱安裝要垂直。
2、裝柱時(shí)要均勻平整，不能有氣泡。
平衡緩沖液的選擇：
平衡緩沖液是指裝柱后和上樣后用于平衡離子交換色譜柱的緩沖液。
平衡緩沖液的離子強(qiáng)度和pH值要保證各個(gè)待分離物質(zhì)的穩(wěn)定，要使各個(gè)待分離物質(zhì)與離子交換劑有適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合，并盡量使待分離物質(zhì)和雜質(zhì)與離子交換劑的結(jié)合有較大的差別。
沃特世色譜柱上樣：
上樣方式有正上柱和反上柱。
上樣時(shí)注意樣品液的離子強(qiáng)度和pH值，上樣量應(yīng)小于工作交換量。
沃特世色譜柱洗脫：
1、洗脫液的選擇：
（1）保證所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都是穩(wěn)定的。
（2）要使結(jié)合在離子交換劑上的所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都能夠被洗脫。
（3）梯度范圍盡量小一些，以提高分辨率。
2、洗脫方式：
離子交換色譜一般采用梯度洗脫，通常有改變離子強(qiáng)度和改變pH值兩種洗脫方式。
（1）改變離子強(qiáng)度的洗脫：
在洗脫過程中逐步增大離子強(qiáng)度，從而使與離子交換劑結(jié)合的各個(gè)組分被洗脫下來。
（2）改變pH值的洗脫：
陽(yáng)離子交換劑一般是pH值從低到高洗脫，陰離子交換劑一般是pH值從高到低洗脫。
由于pH值可能對(duì)蛋白的穩(wěn)定性有較大的影響，一般采用改變離子強(qiáng)度進(jìn)行洗脫。
